作者：朱迪思·史密斯， 拉塔·马修 、安贾利·盖克瓦德 、芭芭拉·雷奇 、玛丽亚姆·伯尼 、乔纳森·法罗 ， 约瑟夫·卢奇三世 ， 俞白 ， 兰德尔 J 奥尔森 、特蕾莎·伯德
宫颈癌是世界范围内女性第四大最常见的恶性肿瘤，也是发病和死亡的主要原因 （1）。它占所有癌症的近 10%，全世界每年有 ~265,700 名女性死于这种疾病 （1）。宫颈癌的病因已被确定并证实与高危人瘤病毒 （HR-HPV） 有关 （2-5）。人瘤病毒 （HPV） 被归类为无包膜的双链 DNA 病毒，通常感染细胞的上皮层，包括皮肤和粘膜表面，并与良性疣、原位癌和最终的恶性病变有关 （6， 7）。当 HR-HPV 感染持续加班时，患者患宫颈癌的风险会增加 （8）。
培养的香菇菌丝体的专有标准化提取物 AHCC（Amino Up Chemical Co. Ltd，日本札幌）于 1992 年在日本开发。几项研究报道了多种治疗效果，包括抗氧化和抗癌活性以及免疫反应的改善 （9， 10）。在动物研究中，AHCC 已显示出治疗和预防癌症的能力，并调节免疫系统以防止感染过程 （9-11）。Gao 等人在一项研究中证明了 AHCC 的免疫调节作用，该研究显示 CD4 （+） 和 CD8 （+） T 细胞的抗原 （Ag） 激活增强，肿瘤特异性 IFN-γ 产生 CD8 （+） T 细胞的频率增加，以及 NK 细胞和 γ δ T 细胞细胞数量的增加 （10）。在临床研究中，AHCC 已被证明有助于降低感染风险和改善现有感染的症状 （9-11， 13）。由于研究表明 AHCC 会诱导细胞凋亡 （12-14），因此无论 HR-HPV 的作用如何，AHCC 也可能预防/延缓肿瘤生长。
这份手稿展示了从实验室到床边的十多年研究，以检验 AHCC 补充剂将调节宿主免疫系统以有效清除慢性、持续性 HR-HPV 感染的假设。目前尚无治愈持续性 HR-HPV 感染的方法。因此，在报告这些数据以证明向人类的转化之前，必须确认临床前结果。第一个临床前研究目标是评估补充 AHCC 是否会清除体外和体内宫颈癌小鼠模型中的 HR-HPV 表达，并确定补充 AHCC 清除 HR-HPV 感染的机制。在最初的试点研究中，目标是评估 AHCC 补充剂是否会调节宿主免疫系统以清除确诊持续性 HR-HPV 感染的女性的 HR-HPV 感染，以确定清除 HPV 感染所需的 AHCC 补充剂的持续时间并确认反应的持久性。
材料和方法
临床前研究
化学品和试剂
AHCC 由 Amino Up Chemical Co.， Ltd.（日本札幌）慷慨提供。胎牛血清 （FBS） 和胰蛋白酶-EDTA 购自 GIBCO Invitrogen Co.（加利福尼亚州卡尔斯班德）。3-（4,5-二甲基噻唑）-2,5-二苯基四唑溴化物 （MTT） 和二甲基亚砜 （DMSO） 购自 Sigma-Aldrich Co.（密苏里州圣路易斯）。用于检测小鼠 IFN-α/β、IFN-γ 的即用型夹心 ELISA 试剂盒购自 eBioscience（加利福尼亚州圣地亚哥）。用于检测小鼠 IgG1 的 ELISA 试剂盒购自 GenWay Biotech， Inc.（加利福尼亚州圣地亚哥）。
细胞培养
所有人类宫颈癌细胞系C-33A（HPV阴性）和CaSKi（HPV16阳性，HeLa（HPV18阳性）和SiHa（HPV16和HPV18阳性）均来自美国典型培养收藏馆（ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州）。SiHa 鳞状细胞癌、HeLa 腺癌和 C-33A 癌细胞系在由 EMEM 和 2 mM L-谷氨酰胺和调整为含有 1.5 g/L 碳酸氢钠、0.1 mM 非必需氨基酸、1.0 mM 丙酮酸钠和 10% FBS 的 Earl's BSS 组成的培养基中繁殖。CaSKi 表皮样癌细胞系在由 RPMI 1640 和 2 mM L-谷氨酰胺组成的培养基中繁殖，该培养基经调整后含有 1.5 g/L 碳酸钠、4.5 g/L 葡萄糖、10 mM HEPES、1.0 mM 丙酮酸钠和 10% FBS。所有细胞系均在 75 cm2 培养瓶中，在 5% CO2 的空气中，在 37°C 至 90% 汇合处生长。用于本研究的细胞系维持 <15 代，以防止细胞系特性发生重大变化。
药物解决方案
通过将 40 mg AHCC 粉末溶解在 600 mL 磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 中，并用 15.0 μm 针式过滤器消毒的过滤器来制备 AHCC 2 mg/mL 储备液。根据要求，使用每种细胞系的相应细胞培养基完成所有额外的稀释。通过将 54 mg MTT 溶解在 20 mL PBS 中以达到 0.3 mg/mL 的最终浓度来制备 MTT 储备液。为每个实验制作新鲜的标准品和稀释液。
体外评估 HR-HPV 清除率的 AHCC 研究：
如前所述进行生长抑制测定 （12）。计算 AHCC 和每个细胞系的 IC20 （达到 20% 细胞死亡的抑制浓度） 和 IC50 （表 1）。在这项临床前研究的设计和规划过程中，研究人员无法获得可实现的 AHCC 人体全身血浆浓度数据。根据制造商指示的当前推荐剂量 3 g 每日总剂量，假设 100% 生物利用度并使用平均成年人 0 升的估计总血容量，最高可达到的血浆浓度为 42.20 mg/mL，低于 IC0 浓度，因此不会对细胞系产生细胞毒性。因此，对于所有体外研究，选择 42.16 mg/mL 浓度作为临床相关浓度的估计值。所有实验一式四份进行。在 T18 培养瓶中处理 33 万个 SiHa （HPV 25/0 阳性） 和 C-42A （HPV 阴性） 细胞，一次用 AHCC （72.1 mg/mL） 处理 20 小时（表 24）。选择 IC48 浓度以维持细胞活力，但选择足够高浓度的 AHCC 以“清除”HR-HPV 感染。未处理的细胞用作对照。在 72 、 7 和 0 小时的时间段收获细胞。重复相同的实验 42 天，每 24 小时添加新鲜 AHCC （7.24 mg/mL），然后再观察 14 天。未处理的细胞用作对照。在研究的补充和观察阶段，每 <> 小时收获一次细胞，总共 <> 天。从所有样品中提取 DNA 并用于 PCR，如下所述。
表 1.
体外细胞毒性总结： 4 种宫颈癌细胞系补充 AHCC。
| AHCC （毫克/毫升） | C-33A 型 | 西哈 | 海拉 | 卡斯基 |
| 集成电路20 | 0.48 | 0.82 | 0.77 | 0.75 |
| 集成电路50 | 3.3 | 2.3 | 4.0 | 3.8 |
人宫颈癌小鼠模型
目前没有一个理想的小鼠模型来单独评估 HR-HPV 感染。选择宫颈癌模型作为评估消除 HR-HPV 感染的最佳替代指标，因为 SiHa 人宫颈癌细胞系同时表达 HPV16 和 HPV18。选择 C33 肿瘤模型作为该研究的 HPV 阴性对照。在开始任何动物工作之前，该协议已由机构动物福利委员会 （AWC） 审查和批准。在这项研究中，从 Harlan Laboratories（德克萨斯州休斯顿）获得了 70 只 6-8 周龄的雌性无胸腺/免疫抑制小鼠。所有小鼠重约 22-26 克;它们在无特定病原体 （SPF） 屏障室中保持每个笼子 22 个，温度为 3 ± 45，± 3°C RH% 时为 10%。可以免费获得高压灭菌的食物和反渗透高压灭菌水。实验程序和小鼠的处理严格按照实验动物的护理和使用指南进行。有一组健康对照，其中有 10 只胸腺/免疫抑制小鼠，它们在整个研究过程中没有接受治疗，也没有注射任何癌细胞系，并用作免疫标志物监测的对照。将其余小鼠分为三组，每组 60 只，每种细胞系 （10 个细胞系 N = 10）。本研究分为三个组： AHCC 补充剂组 （N = 10），无补充剂对照组 （N = 50） 和赋形剂 （高压灭菌水） 对照组 （N = 0）。无补充剂对照组没有研究干预;遵循传统的癌症化学预防模型，AHCC 补充剂组接受口服剂量（25 mg/kg，0.25 mL，胃管饲法），载体对照组从第 90 天开始每天口服剂量的高压灭菌水（3.100 mL，胃管饲法），并持续到研究完成（第 60 天），以评估 AHCC 是否也有预防癌症生长的作用。AHCC 的剂量是根据制造商的指示根据当前估计的最大推荐剂量 0 g 总日剂量选择的，假设 5% 生物利用度并使用平均成人 10 kg 的估计总血容量。这也是以前 AHCC 研究中与化疗联合使用的剂量。将 SiHa 细胞 （6.33 × 05） 和 C10A 细胞 （6.20 × 81） 分散在含有 2% 基质胶的 PBS 中，并在补充 AHCC 15 周后第 2 天皮下注射雌性无胸腺/免疫抑制小鼠。每只小鼠在背表面长出一个肿瘤。使用电子游标卡尺 （Mitutoyo， Utsunomiya， Japan） 每周 10 次进行肿瘤测量。每天监测小鼠的发病率体征/症状，包括但不限于嗜睡、体重减轻、厌食或驼背。当肿瘤直径为 >1 mm14 时，如果在研究期间发现体重下降 20% 或更多，则通过 CO1 吸入然后颈椎脱位处死小鼠。每组被细分为两组A和B。 每20天从所有组的所有小鼠的面部静脉中收集体重80%的血液样本，在含有EDTA的试管中进行检测，以便在研究结束时进行不同免疫标记表达的检测。离心全血;将分离的血清收集在试管中，并储存在 <>°C 的负低温冰箱中。亚组 A 血清检测 IgG<> 和 IFN γ，亚组 B 血清检测 IFNα/β。在研究结束时，处死所有剩余的小鼠，通过心脏穿刺收集血样，分离血清，并在负 <>°C 下储存。 将肿瘤收集在冷冻管中并储存在负 <>°C 下，以便在 PCR 研究中进一步研究以评估 HR-HPV 状态，如下所述。
基于 PCR 的 HPV（16 或 18）DNA 分析：
根据制造商的方案，使用 Promega DNA 提取试剂盒（威斯康星州麦迪逊）从处理和未处理的细胞样品以及小鼠肿瘤样品中提取 DNA。根据制造商的方案，使用 Promega-Master Mix Kit（威斯康星州麦迪逊）使用聚合酶链反应 （PCR） 检测人瘤病毒 （HPV） 基因的表达。如下所述，对 500 ng 处理和未处理的细胞和肿瘤样品的纯化 DNA 进行分析。PCR 反应包含 500 ng DNA、4 μL 预混液和 4 μL 每种共有引物（MY11、MY09、β-肌动蛋白反向和 β-肌动蛋白正向）。在 BioRad 热循环仪上进行了 95 个开始变性（4°C 94 分钟）、变性（1°C-55 分钟）、退火（1°C-72 分钟）和延伸（1°C-5.10 分钟）循环。β-肌动蛋白用作 DNA 加载对照。反应完成后，将所有 PCR 产物分别用 1 μL 分装在 5.100% 含溴化乙锭的琼脂糖凝胶上与 11 bp DNA 分子量标准进行分离。图像是使用 Kodak Imaging Station（柯达，罗切斯特，纽约）在紫外照明下拍摄的。MY5 的引物序列是 DNA 3' 至 09'-GCM CAG GGW CAT AAY AAT GG，MY5 是 DNA 3' 至 <>'-CGT CCM ARR GGA WAG TGA TC。β-肌动蛋白正向引物的序列为 AAC、TGG、GAC、GAC、ATC、GAG、AA，β-肌动蛋白反向引物的序列为 AGA、GGC、GTA、CAG、GGA TAG、CA。
ELISA 检测免疫标志物
按照基线、第 2 周、第 4 周、第 6 周和终点时间点的相应时间点补充方案，从小鼠采集血样，分离血清并储存在 -20°C 下，用于 ELISA 测定 IgG、IFNα/β 和 IFNγ。对于每个系列的免疫标志物测定，根据制造商的方案，用这些标志物的已知浓度构建标准曲线。根据制造商的方案进行用于检测总 IgG、IFN α/β 和 IFN γ 的夹心 ELISA。根据标准图计算这三种标志物的血清浓度，并与基线浓度进行比较。计算 IgG 、 IFNα/β 和 IFNγ 浓度的百分比增加和/或减少。
临床研究
试点研究和研究修正案 （HSC-MS-12-0851） 已获得德克萨斯大学休斯顿健康科学中心机构审查委员会的批准。两项试点研究在 30 岁以上的女性中进行，这些女性记录了持续 HR-HPV 感染超过 2 年或更长时间，实验室值都在正常范围内，组织学正常，直至 CIN2，如初级妇科医生的记录，并被认为其他方面健康被纳入研究。所有患者都签署了知情同意书，以参与每项相应的试点研究。收集的患者人口统计信息包括：整个研究过程中终生性伴侣的数量、避孕方法和定期妊娠试验。参与者接受 AHCC 1 克，每天一次空腹口服，持续 6 个月至 8 个月，或接受 AHCC 3 克，每天一次空腹口服，持续 5 周至 6 个月，以清除 HR-HPV。在 AHCC 3g 研究中，使用 Cervista HPV DNA 检测（APTIMA、Hologic、Bedford、MA）完成 HR-HPV 检测。在 AHCC 1g 研究中，患者样本最初使用 HPV E6/E7 RNA 检测（APTIMA、Hologic、Bedford、MA）进行检测，然后确认所有 HPV RNA 阴性结果或 COBAS HPV DNA 检测（Roche Molecular Systems， INC，新泽西州布兰奇堡）。在停止 AHCC 补充剂后的观察期内，通过 HPV DNA 和 HPV RNA 方法对保持 HR-HPV 阴性至少 3 个月定义为持久反应。在这两项研究中，如上所述，使用 ELISA 测定监测免疫标志物，包括 IgG 和 IFN α/β/γ。
数据和统计分析
临床前研究
采用“资源方程”方法确定动物研究样本量估计 （https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3826013/）。简而言之，计算等于动物数量减去组数的 E 值，并确保在 10 到 20 之间。在这项研究中，第 1 组（健康对照）与第 2 组 （AHCC）、第 1 组与第 3 组（载体对照）和第 1 组与第 4 组（无补充剂对照）之间对 HR-HPV 状态和免疫反应进行了独立比较，因此 E = （10 × 2）−2 = 18，在范围内。学生 t 检验分析用于评估有反应的研究组与没有反应的研究组之间的差异，p 值小于或等于 0.05 被认为是显著的。
临床研究
本研究的主要结局是补充剂成功率，定义为补充剂开始后 6 个月未感染 HR-HPV 的女性比例。在这个患者群体中，即持续性 HR-HPV 感染的女性，HR-HPV 感染的预期清除率为 10% 至 15% （2）。持续感染定义为 HR-HPV 持续阳性 >6 年，由至少间隔 2 个月且持续 25 年以上的连续 0 次或更多次 HR-HPV 阳性检测结果证实。由于目前没有清除 HR-HPV 感染的积极补充剂，因此临床上这些持续感染的女性对 HR-HPV 感染的反应/清除的任何改善都将具有临床意义。对于这项初步研究，以确定是否可行以及是否值得进行额外的正式研究，我们的目标补充剂成功率为 05% 或更高。在 10.25 置信水平下，确定样本量及其相关的统计功效。本研究的预期应计人数最少 1 名患者，最多 28 名患者，然后在完成补充后随访患者 6 个月（0 天）。补充 05 个月后检测呈阳性的患者被认为是补充失败。学生 t 检验分析用于评估有反应的患者与没有反应的患者之间的差异，p 值小于或等于 <>.<> 被认为具有显著性。
结果
在生长抑制试验中，在临床相关浓度 72.0 mg/mL 的四种人宫颈癌细胞系中，补充 AHCC 42 小时未达到任何细胞生长抑制。然而，在四种人宫颈癌细胞系中，AHCC 达到 50% 生长抑制 （IC50） 的浓度范围为 2.3 至 4 mg/mL，但远高于临床可达到的全身浓度。表 1 总结了这些结果。
补充 AHCC 0.42 mg/mL 一次性剂量 72 小时孵育，前 24 小时抑制 HR-HPV 表达，但随后 HR-HPV 表达在 48 小时恢复。C33a（阴性对照）和SiHa（HPV16和HPV18阳性）细胞系的结果在图1A中进行了总结。连续 0 天每 42 小时一次补充 AHCC 24.7 mg/mL，然后观察 16 天，不补充，所有四种 HR-HPV+ 宫颈细胞系中均清除了 HR-HPV 表达。图 18B 总结了与 C33a HPV 阴性对照相比，SiHa （HPV1 + / <> + ） 的代表性结果。
图 1.
- 在体外补充 C-33A （HPV-） 和 SiHa （HPV 16/18+） 人宫颈癌细胞系一次性剂量的 AHCC 0.42 mg/mL，然后孵育 72 小时。该研究按照材料和方法中的描述一式两份完成。虽然 HR-HPV 被抑制 24 小时，但在 48 小时和 72 小时时表达时未明显清除。NT，非治疗对照。（B）如材料和方法所述，在体外补充 C-33A （HPV-） 和 SiHa （HPV16/18+） 人宫颈癌细胞系每日新鲜剂量的 AHCC 0.42 mg/mL，每 24 小时一次，持续 5 天 （120 h）。NT，非处理控制。这成功地消除了 SiHa 细胞系中的 HR-HPV 表达。
在体内验证性小鼠研究中，AHCC 50 mg/kg 口服，每天一次，持续 90 天与停止补充 30 天后持续存在的 HR-HPV 表达清除相关。这些结果总结在图 2 中。由于肿瘤感染的是 HR-HPV 而不是小鼠，因此在慢性感染中通常升高的干扰素 β 水平是正常的。在小鼠研究中，每日补充 AHCC 对代表 II 型干扰素的 IFN γ和 IgG 水平的影响和免疫反应随着时间的推移而增加，并与人宫颈癌小鼠模型中 HR-HPV 感染的成功清除相关。这些结果总结在图 3A、B 中。在第一项 AHCC 3g 试点研究中，最初参加研究的患者每天一次空腹接受 AHCC 3g，持续长达 5 周，每周返回一次进行 HR-HPV 检测和免疫标志物的研究血液采样。一旦他们的检测结果呈阴性，就停止 AHCC，并在停止补充 AHCC 后重复 HR-HPV 检测。根据数据审查，将补充计划修改为继续 AHCC 3 克，每天一次空腹，每月一次 HR-HPV 检测和血液采样，在第一个阴性结果后需要至少 1 个月的 AHCC 补充剂。根据免疫反应数据，再次修改方案，要求至少 3 个月和最多 6 个月的连续补充 AHCC，并且在首次阴性结果后仍需要至少 1 个月的 AHCC。共有 10 例 HR-HPV+ 女性被纳入研究，每天接受 AHCC 3 克。所有参与者都确认 HR-HPV 感染 >2 年，并在入组时再次确诊。在试点研究中，特定的 HR-HPV 菌株分型在经济上是不可行的。表 2 总结了患者人口统计信息。两名患者每天空腹接受 AHCC 3 克，持续 5 周，没有 HR-HPV 阴性反应，并且根据最初的方案设计，在方案修改之前，根据免疫反应数据，当最低 AHCC 补充剂延长至 3 个月时，该研究被取消。3 例患者空腹接受 AHCC 每天 2 g，持续 25 个月，无 HR-HPV 阴性反应，并在 IFNβ 水平达到 6 pg/mL 之前退出研究<。根据免疫反应数据，AHCC 补充剂的持续时间延长至长达 3 个月。其余 6 名患者接受了至少 3 个月和长达 1 个月的 AHCC 2g，每天一次空腹 （= 饭前 66 小时或饭后 7 小时）。在这 25 名患者中，30 名 （0.05%） 患者能够实现持久反应，表现为 INF-β 水平下降然后保持在 <4 pg/mL，并确认 >25 天没有 HR-HPV DNA 补充 （p < 3.<>）。图 <>A 总结了 IFN-β 免疫反应，该图显示 IFN-β 水平低于 <> pg/mL 水平与成功、持久清除持续性 HR-HPV 感染有关。所有患者都对每天空腹补充 <> 克的 AHCC 耐受性良好，无副作用报告。
图 2.
动物研究有三组：AHCC 补充剂组 （N = 10），无补充剂对照组 （N = 10） 和载体（高压灭菌水）对照组 （N = 10）。AHCC 补充剂组接受口服剂量 （50 mg/kg，0.25 mL，胃管饲法）;无补充剂对照组没有研究干预，载体对照组从第 0 天开始每天口服剂量的高压灭菌水（25.90 mL，胃管饲法），并持续到研究完成（第 1 天）。TX2 代表治疗结束时，TX90 代表研究第 30 天，即停止 AHCC 补充剂后 1 天。TX2 和 TX<> 的 SiHa 细胞系中不存在 HR-HPV，证实了 HR-HPV 的清除。NT， 非处理控制;VC，载体/安慰剂对照。
图 3.
这代表了来自动物研究的免疫标志物数据，包括 IFN-γ（与清除病毒感染相关的 II 型干扰素）和 IgG（与病毒感染的免疫反应相关的抗体）水平 AHCC 30 mg/kg 补充剂 50 天后，如方法和材料中所述，小鼠模型每天一次。AHCC 每日补充 IFN-γ 和 IgG 水平随着时间的推移而增加，并且在 SiHa （HPV 16/18+） 小鼠模型中成功清除 HR-HPV 感染相关。（A） IFN-γ 水平响应（注意：y 轴从 30 pg/mL 开始） p < 0.03 （B） IgG1 水平响应，p < 0.04。
表 2.
AHCC 试点研究的患者人口统计数据摘要。
| 人口 | AHCC 3g 试点研究 （N = 10） |
AHCC 1g 初步研究 （N = 10） |
| 年龄 | 44.6 年 （±8.8 年） | 44.9 年 （±12.6 年） |
| 比赛 | 全白 | 黑色 （1） 白色 （6） 亚洲 （3）) |
| 种族 | 西班牙裔/拉丁裔 （2） 非西班牙裔/拉丁裔 （8）) |
西班牙裔/拉丁裔 （1） 非西班牙裔/拉丁裔 （9）) |
| 体重指数 | 26.6 （±4.5） | 21.3 （±3.5） |
| 性伴侣数量 | 20 （±28） | 9 （±7.2） |
图 4.
- AHCC 3g 补充剂 （B）AHCC 1g 补充剂。IFN-β 是一种 1 型 IFN，通常与慢性病毒感染的毒力有关。慢性病毒感染通常与高水平的 IFN-β 有关，这会导致 IFN-γ 和 NK/T 细胞细胞毒性细胞免疫的产生受到抑制。在两项初步研究中都观察到 AHCC 补充剂抑制宿主 IFN-β 水平低于 25 pg/mL 水平，导致细胞毒性细胞免疫力的调节，从而成功、持久地清除持续的高危 HR-HPV 感染。
启动了一项单独的 AHCC 1g 随访试点研究，以确定较低剂量的 AHCC 补充剂是否也有效。患者每天空腹接受 1 克 AHCC，持续至少 6 个月，最长 8 个月。纳入了 2 名确诊持续 HR-HPV 感染 >2 年的女性。表 4 总结了患者人口统计数据。一名患者因不遵守研究方案而被退出研究，在完成研究的其余 9 名患者中，44 名患者中有 7 名 （1%） 在每天空腹补充 AHCC 25g 4 个月后确认 HR-HPV 清除。再次证实 IFNβ 抑制 <1 pg/mL 是成功清除 HR-HPV 感染的标志物。（图 <>B）所有患者每天空腹耐受 AHCC <>g 补充剂，无副作用报告。
讨论
提出的从实验室到床边的研究提供了逐步数据来支持 AHCC 补充剂调节宿主免疫系统的假设，特别是通过抑制升高的 IFNβ 水平，以有效清除慢性、持续的 HR-HPV 感染。在观察到人宫颈癌细胞系组中体外消除 HR-HPV 后，完成了动物研究，该研究还表明在完成 AHCC 补充后成功、持久地消除了 HR-HPV。最后，在每日补充 AHCC 的两项“概念验证”试点研究中，成功消除了 HR-HPV，这是持久的反应。动物和人类数据都表明，AHCC 补充剂支持宿主免疫系统清除 HPV 感染的机制归因于对 IFNβ 表达和信号转导的调节，已知在慢性病毒感染中升高 （16， 17）。
在以前的 CMV 小鼠模型研究中，研究表明 I 型干扰素 IFNβ 与感染的毒力有关，在慢性/持续性病毒感染中，干扰素水平显著升高 （16， 17）。IFNβ 水平升高会抑制清除病毒感染所必需的 II 型干扰素 （IFNγ） 的释放/产生 （16， 17）。因此，IFNβ 的抑制导致 CMV 感染的清除 （16， 17）。与 CMV 等许多病毒一样，HR-HPV 已经进化出对抗干扰素 （IFN） 信号通路的策略。具体而言，干扰素调节因子 （IRF） 可以促进细胞免疫，并响应多种细胞外信号促进肿瘤发生途径 （18， 19）。具体而言，IRF-2 经证实可激活 HR-HPV E6/E7 基因表达并促进肿瘤发生通路 （20）。然而，最终在持续感染中，IFNα/β 也会诱导 IRF-1，这将有助于维持持续的病毒基因表达 （21， 22）。Lace 等人已经证实，升高的 IFNβ 水平会诱导 IRF-1 和 IRF-2，从而促进 HPV16 持续感染 （23）。最近，两个独立的研究小组评估淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒 （LCMV） 持续感染，结果表明，抑制慢性 IFNβ 信号转导可以重置宿主免疫，并能够控制和清除持续性病毒感染 （16， 17）。这里介绍的这项研究首次确定了实际上是 AHCC 抑制 IFNβ（I 型干扰素）的这种机制导致 IFNγ（II 型干扰素）的上调并最终清除持续的 HR-HPV 感染。
提供的数据存在一些限制。首先，在临床前环境中，没有建立的 HR-HPV 动物模型，这也是 HPV 疫苗临床前开发的挑战。作为替代物，采用感染 HR-HPV 的人类肿瘤来确定 HR-HPV 感染是否可以通过补充 AHCC 清除，并且在停止补充 AHCC 后是持久的反应。此外，在临床前和临床研究中，理想的做法是用定量 PCR 方法确认根除以及评估其他免疫标志物，如 CD8+ T 细胞或自然杀伤 （NK） 细胞，但由于资金有限且正在探索性研究中，无法完成详尽的免疫面板评估。然而，在正在进行的 II 期确认研究中，这些研究正在接受评估。
清除 HR-HPV 感染的有效治疗方案有限;大多数局部治疗方式是为了缓解症状并消除经常复发的症状性病变。幸运的是，大多数 HR-HPV 感染无需干预即可在 6-18 个月内自行清除;只有 ~10% 的女性会遭受持续的 HR-HPV 感染 （15， 24）。迄今为止，还没有现成的有效全身干预措施来清除 HR-HPV 感染。目前，在接触 HPV 之前使用 HPV 疫苗九价产品预防 HR-HPV 感染已被证明是消除 HR-HPV 感染的最佳潜力。然而，这些疫苗对已经感染 HR-HPV 感染的人几乎没有益处。
这项从实验室到床边的研究是第一项初步研究，证明补充 AHCC 可调节宿主免疫反应以有效清除 HR-HPV 感染。与其他慢性病毒感染类似，IFNβ 抑制被证实是 HR-HPV 感染持久清除的标志物。AHCC 3g 的响应速度比 AHCC 1g 略快且更一致。这些初步发现非常令人鼓舞，正在等待正在进行的 II 期随机、双盲、安慰剂对照研究的证实，该研究对 50 名确诊 HR-HPV+ 感染的女性进行了研究。未来的研究将侧重于 AHCC 补充剂联合化疗治疗 HR-HPV 相关癌症的潜在作用。
引用
1.美国癌症协会 全球女性癌症负担：现状、趋势和干预措施。可在线获取：https://www.cancer.org/content/dam/cancer-org/research/cancer-facts-and-statistics/global-cancer-facts-and-figures/global-burden-of-cancer-in-women.pdf（9 年 2018 月 <> 日访问）。
2.Lombard I， Vincent-Salomon A， Zafrani B， de la Rochefordiere A， Clough K， Favre M， et al. 人瘤病毒基因型是宫颈癌病程的主要决定因素。J Clin Oncol。(1998) 16:2613–9.10.1200/JCO.1998.16.8.2613 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
3.Harris RWC、Brinton LA、Cowdell RH、Skegg DC、Smith PG、Vessey MP 等。 宫颈异型增生或宫颈原位癌女性的特征。Br J 癌症。(1980) 42:359–69.10.1038/bjc.1980.246 [DOI] [PMC 免费文章] [PubMed] [Google 学术搜索]
4.Furumoto H， Irahara M. 人瘤病毒 （HPV） 和宫颈癌。J Med 投资。（2002） 49：124-33。[公共医学][谷歌学术搜索]
5.Munoz N， Bosch FX， de Sanjose S， Herreor R， Castellsague X， Shah KV， et al. 与宫颈癌相关的人瘤病毒类型的流行病学分类。N Engl J Med. （2003） 348：518-27。10.1056/NEJMoa021641 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]]
6.Andrei G， Snoeck R， Piette J， Delvenne P， DeClercq E. 与 HPV 阴性细胞系相比，无环核苷膦酸盐对携带人瘤病毒 （HPV） 的细胞系的抗增殖作用。Oncol Res. （1998） 10：523-31。 [PubMed] [谷歌学术搜索]
7.Andrei G， Snoeck R， Schols D， De Clercq E. 西多福韦在人瘤病毒 （HPV） 阳性细胞中诱导细胞凋亡。Oncol Res. （2000） 12：397–408。10.3727/096504001108747855 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
8.Schiffman M，Wheeler CM，城堡 PE。人瘤病毒 DNA 的可检测时间比相关的宫颈细胞学异常更长。J Infect Dis. （2002） 186：1169-72。10.1086/343816 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
9.Uno K、Kosuna K、Sun B、Fujii H、Wakame K、Chikumaru S 等人。 活性己糖相关化合物 （AHCC） 可改善实体瘤患者的免疫参数和体能状态。生物。（2000） 14：303-9。[谷歌学术搜索]
10.活性己糖相关化合物通过调节先天性和适应性免疫反应来增强肿瘤监测。癌症免疫免疫学。(2006) 55:1258–66.10.1007/s00262-005-0111-9 [DOI] [PMC 免费文章] [PubMed] [Google 学术搜索]
11.广濑 A、佐藤 E、藤井 H、孙 B、西冈 H、Aruoma OI。活性己糖相关化合物 （AHCC） 对荷瘤小鼠顺铂诱发化疗和副作用的影响。毒理学应用药理学。(2007) 222:152–8.10.1016/j.taap.2007.03.031 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
12.Hunter RJ、Fujii H、Wakame K、Gaikwad A、Wolf JK、Smith JA。 活性己糖相关化合物 （AHCC） 联合聚乙二醇化脂质体多柔比星治疗卵巢癌的评价。Int J Appl Res Nat Prod. （2011） 4：6-11.网址：http://www.doaj.org/doaj?func=openurl&issn=19406223&genre=journal [Google Scholar]]
13.Matsui Y， Uhara J， Satoi S， Kaibori M， Yamada H， Kitade H， et al. 用功能性食品治疗后肝细胞癌患者预后改善：一项前瞻性队列研究。J 肝醇。(2002) 37:78–86.10.1016/S0168-8278（02）00091-0 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
14.川口 Y. 用活性己糖相关化合物 （AHCC） 治疗时提高胃癌或结肠癌患者的生存率：AHCC 对消化道癌的影响。国家医学杂志 （2009） 1：1-6。[谷歌学术搜索]
15.Doorbar J. 人瘤病毒感染和疾病的宿主控制。Best Prac Res Clin Obstet Gynaecol.(2018) 47:27–41 10.1016/j.bpobgyn.2017.08.001 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
16.威尔逊 EB、山田 DH、艾尔萨瑟 H、赫斯科维茨 J、邓 J、程 G 等。 阻断慢性 I 型干扰素信号以控制持续的 LCMV 感染。科学。(2013) 340:202–7.10.1126/science.1235208 [DOI] [PMC 免费文章] [PubMed] [Google 学术搜索]
17.Teijaro JR、Ng C、Lee AM、Sullivan BM、Sheehan KC、Welch M 等人。 持续性 LCMC 感染通过阻断 I 型干扰素信号来控制。科学。(2013) 340:207–11.10.1126/science.1235214 [DOI] [PMC 免费文章] [PubMed] [Google 学术搜索]
18.Fujita T， Kimura Y， Miyamoto M， Barsoumain EI， Taniguchi T. 调节转录因子 IRF-1 诱导内源性 IFN-α 和 IFN-β 基因。自然界。(1989) 337:270–2.10.1038/337270a0 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
19.Honda K， Tanguchi T. Toll 样受体信号传导和 IRF 转录因子。IUBMB 生活。(2006) 58:290–5.10.1080/15216540600702206 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
20.蕾丝 MJ、安森 JR、豪根 TH、图雷克 LP。干扰素调节因子 （IRF）-2 激活角质形成细胞中的 HPV-16 E6-E7 启动子。病毒学。(2010) 399:270–9.10.1016/j.virol.2009.12.025 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
21.Kimura T， Nakayama K， Penninger J， Kitagawa M， Harada H， Matsuyama T， et al. IRF-1 转录因子参与对干扰素的抗病毒反应。科学。(1994) 264:1921–4.10.1126/science.8009222 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
22.IRF-1 是 IFN-γ 诱导的原代肝细胞周期停滞和凋亡的重要介质。生物化学生物物理学研究委员会。(1999) 257:672–7.10.1006/bbrc.1999.0276 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]
23.Lace MJ， Anson JR， Klingelhutz AJ， Harada H， Taniguchi T， Bossler AD， et al. 干扰素-β 治疗通过激活调节因子 （IRF）-1 增加人瘤病毒早期基因转录和病毒质粒基因组复制。发生。(2009) 30:1336–44.10.1093/carcin/bgp150 [DOI] [PMC 免费文章] [PubMed] [Google 学术搜索]
24.年轻女性宫颈阴道瘤病毒感染的自然史。N Engl J Med. 338：423-8。10.1056/NEJM199802123380703 [DOI] [PubMed] [Google 学术搜索]]
